Uma vez que muitos dos aspectos envolvidos na patogenia dos processos desmielinizantes do sistema nervoso central (SNC) são ainda pouco esclarecidos e que os astrócitos parecem estar envolvidos na mediação de tais processos, este estudo analisou morfologicamente a participação astrocitária na desmielinização do SNC por meio da marcação imunoistoquímica de duas proteínas dos filamentos intermediários astrocitários - a proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e a vimentina (VIM) -, comparando amostras de cerebelo e de tronco encefálico de oito cães com cinomose e de dois cães normais, de diferentes raças e com idades entre um e quatro anos. Cortes histológicos dos tecidos foram submetidos à marcação pelo método indireto da avidina-biotina-peroxidase (ABC) e a reatividade astrocitária, observada em microscopia de luz, foi quantificada em um sistema computacional de análise de imagens. Observou-se, na maioria dos cortes de animais doentes, a presença de lesões degenerativas compatíveis com desmielinização. A marcação para a GFAP e para a VIM foi mais intensa nos animais com cinomose do que nos animais normais, especialmente nas regiões circunventriculares e nas adjacentes às áreas de degeneração tecidual. Não houve diferença significativa entre a imunomarcação (GFAP e VIM) dos animais com cinomose com e sem infiltração inflamatória da substância branca do cerebelo. O aumento da imunorreatividade dos astrócitos para a GFAP e a reexpressão de VIM nas áreas lesionais indicam o envolvimento astrocitário na resposta do tecido nervoso às lesões desmielinizantes induzidas pelo vírus da cinomose (CDV) no SNC.

Considering that many aspects involved in the pathogenesis of the central nervous system (CNS) demyelinating diseases are still poorly understood and that astrocytes seem to mediate such processes, this study analyzed the participation of astrocytes in the demyelinating processes of CNS by using immunohistochemical staining of two astrocytic proteins - glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) -, comparing samples of cerebellum and brainstem from eight dogs with canine distemper and from two healthy dogs, from different breeds and ages varying from 1 to 4 years old. Histological sections were submitted to the avidin-biotin-peroxidase indirect method of immmunohistochemical staining (ABC) and the astrocytic reactivity, observed in light microscopy, was quantified in a computer system for image analysis. It was possible to notice, on most of the sections from sick animals, degenerative lesions that indicate demyelination. The immunostaining for GFAP and VIM was more intense on animals with canine distemper, specially around the ventricules and near degenerated sites. There was no significant difference between the immunostaining (GFAP and VIM) of animals with canine distemper with and without inflammatory infiltrate of the cerebellar white matter. The increased immunoreactivity of astrocytes for GFAP and the VIM reexpression in injured areas indicate the astrocytic involvement on nervous tissue response to the demyelinating lesions induced by the canine distemper virus (CDV) in the CNS.

O gliotóxico brometo de etídio (BE) foi utilizado para o estudo da resposta macrofágica e astrocitária sob imunossupressão com ciclofosfamida (CY). Investigou-se a imunorreatividade astrocitária à proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e à vimentina (VIM), e a imunorreatividade macrofágica ao ED1 após injeção do BE. Foram utilizados ratos Wistar adultos injetados na cisterna basal com salina a 0,9% (grupo I), BE a 0,1% (grupo II) e BE a 0,1%, imunossuprimidos com CY (grupo III). Fragmentos do tronco encefálico foram colhidos do 1º ao 21º dia pós-injeção para estudo imuno-histoquímico da GFAP, VIM e ED1. Nos grupos II e III, observou-se imunorreatividade aumentada para GFAP e re-expressão de VIM. No grupo II, células ED1-positivas foram observadas a partir do 2º dia e no grupo III, a partir do 3º dia. Aos 14 dias pós-injeção, havia mais células ED1-positivas no grupo III. A CY aparentemente não alterou a resposta astrocitária.

The gliotoxic ethidium bromide (EB) was used to study morphologically the macrophagic and astrocytic response under immunosuppression by cyclophosphamide (CY). Astrocyte immunoreactivity to glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) and macrophagic immunoreactivity to ED1 were investigated after EB injection. Male Wistar rats were injected with 0.9% saline solution (group I), 0.1% BE (group II) and 0.1% EB associated with CY treatment (group III). Brainstem samples were collected from the 1st to the 21st day post-injection for GFAP, VIM and ED1 immunostaining. In groups II and III, it was observed increased immunoreactivity to GFAP and reexpression of VIM. In group II, ED1-positive cells were noted after the 2nd day and in group III, after the 3rd day. On the 14th day post-injection, it was observed a greater quantity of ED1- positive cells in group III than in group II. Apparently, CY did not change the astrocytic response pattern.

INTRODUÇÃO: O brometo de etídio (BE) é reconhecido como um agente gliotóxico que causa desaparecimento focal astrocitário e oligodendroglial. OBJETIVO: Investigou-se a imunorreatividade astrocitária à proteína glial fibrilar ácida (GFAP) e à vimentina (VIM) após injeção do BE. MÉTODO: Ratos Wistar adultos foram tomados como controles histológicos (grupo H) ou injetados na cisterna basal com BE a 0,1% (grupo E) ou salina a 0,9% (grupo C). Fragmentos do tronco encefálico foram colhidos das 24 horas aos 31 dias pós-injeção para estudo imuno-histoquímico da GFAP e VIM pelo método da avidina-biotina. RESULTADOS: No grupo E, foram observadas extensas lesões na ponte e no mesencéfalo, com desaparecimento astrocitário da área central 24 horas pós-BE, bem como infiltração macrofágica e astrogliose periférica a partir do 3º dia. Os astrócitos marginais apresentaram imunorreatividade aumentada à GFAP e reexpressão de VIM, esta confinada às bordas imediatas do sítio lesional. No grupo C, foram visualizadas lesões pontinas discretas, com preservação astrocitária central e marcação menos intensa para GFAP nos bordos em relação ao grupo E. Nenhuma imunorreatividade para VIM foi notada em tais astrócitos. CONCLUSÃO: Os astrócitos das margens das lesões induzidas pelo BE apresentaram imunorreatividade aumentada para GFAP e reexpressão de VIM.

BACKGROUND: Ethidium bromide (EB) is known as a gliotoxic agent that causes focal astrocytic and oligodendroglial disappearance. OBJECTIVE: Astrocyte immunoreactivity to glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin (VIM) was investigated after EB injection. METHOD: Adult male Wistar rats were taken as histologic controls (group H) or injected into cisterna pontis with 0.1% EB (group E) or 0.9% saline solution (group C). Brainstem samples were collected from 24 hours to 31 days post-injection for GFAP and VIM immunohistochemical staining using avidin-biotin method. RESULTS: In group E, extensive lesions were seen in the pons and mesencephalon, with astrocyte disappearance from the central area 24 hours post-injection. Macrophagic infiltration and peripheral astrocytic reaction were noted after 3 days. Marginal astrocytes presented increased immunoreactivity to GFAP and reexpression of VIM, the last one confined to the edges of the injury site. In group C, discrete pontine lesions were observed, showing central astrocyte preservation and a peripheral GFAP staining less intense comparing to group E. No immunoreactivity to VIM was noted in such astrocytes. CONCLUSION: Astrocytes from the edges of the EB-induced lesions presented increased immunoreactivity to GFAP and reexpression of VIM.